Cách dùng kit test kiểm tra ecoli và coliform bằng Petrifilm 3M
Đĩa Petrifilm 3M E.Coli/Coliform Count (EC) có chứa Violet Red Bile (VRB), chất gel tan được trong nước lạnh, chất chỉ thị hoạt động của glucuronidase và một chất chỉ thị giúp cho việc đếm khuẩn lạc dễ dàng hơn. Hầu hết E.coli (khoảng 97%) sinh beta-glucuronidase, chất này tạo tủa màu xanh gắn kết với khuẩn lạc. Tấm film phía trên giữ bọt khí sinh ra từ quá trình lên men lactose của E.coli và coliforms. Khoảng 95% E.coli có sinh bọt khí, cho khuẩn lạc có màu từ xanh đến xanh – đỏ kèm theo bọt khí trên đĩa Petrifilm.
AOAC INTERATIONAL và U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) xác định Coliforms là trực khuẩn gram âm, hình que, sinh hơi và acid suốt quá trình lên men chuyển hoá lactose. Khuẩn lạc coliform phát triển trên đĩa Petrifilm EC sinh acid, chất chỉ thị pH trong đĩa làm cho lớp keo có màu đỏ. Khí sinh ra được giữ lại xung quanh khuẩn lạc Coliform màu đỏ là dấu hiệu để xác định Coliform.
Việc kiểm tra Ecoli và Coliforms bằng Petrifilm 3M có thể theo nhiều cách khác nhau tùy từng quốc gia.
(Xem phần hướng dẫn thời gian & nhiệt độ ủ) Theo AOAC INTERNATIONAL: E.coli = 49 (khuẩn lạc màu xanh có khí) Colifor m tổng = 87 (Khuẩn lạc xanh và đỏ có khí).
Không sử dụng đĩa này riêng rẻ để phát hiện E. coli O157. Như hầu hết những môi trường kiểm tra E.coli/coliform khác, đĩa này sẽ không hiển thị đặc biệt với bất kì dòng O157 nào hiện diện.
– Chú ý sự thay đổi màu sắc của gel từ hình 2 – 8. Khi số lượng E.coli hay coliform tăng, lớp gel sẽ chuyển sang màu đỏ đậm hoặc tím xanh.
– Những bọt khí li ti là đặc tính của lớp gel, không phải do E.coli hay coliform sinh ra (ô vuông 1).
Số lượng coliform tổng = 28
– Số lượng khuẩn lạc đếm được trên đĩa Petrifilm EC là từ 15 – 150.
– Không đếm số khuẩn lạc ngoài rìa vì chúng không chịu ảnh hưởng của môi trường chọn lọc. (xem vòng 1)
– Bất cứ khuẩn lạc nào có màu xanh (từ xanh đến xanh đỏ) đều biểu hiện sự có mặt của E. coli. Chiếu sáng phía trước sẽ làm nổi bật màu xanh kết tủa trong khuẩn lạc.
– Vòng tròn 1 cho thấy khuẩn lạc có màu đỏ xanh khi chiếu sáng từ phía sau. Vòng tròn 2 cũng là khuẩn lạc đó và được chiếu sáng phía trước. Màu xanh nhìn thấy rõ ràng hơn ở vòng tròn 2.
Ước lượng colifor m tổng = 150
– Diện tích môi trường nuôi cấy khoảng 20 cm2. Ước lượng khi số khuẩn lạc trên đĩa nhiều hơn 150 bằng cách đếm số lượng khuẩn lạc trong 1 hoặc vài ô vuông đại diện và xác định số lượng trung bình trên 1 ô vuông. Nhân số trung bình này với 20 sẽ ước lượng được số khuẩn lạc trên từng đĩa.
Note: Khi số lượng lạc khuẩn quá nhiều không thể đếm thì để xác định số lượng chính xác hơn hãy pha loãng mẫu hơn nữa.
– Những đĩa Petrifilm EC có số lượng khuẩn lạc quá nhiều không thể đếm được có một trong những đặc điểm sau: nhiều khuẩn lạc nhỏ, nhiều bọt khí li ti, phía dưới lớp gel có màu đỏ đến xanh tím.
– Sự tập trung cao của E.coli sẽ tạo nên khu vực phát triển sang màu tía – xanh.
Ước lượng colifor m tổng ~ 10^8
– Khi số lượng coliform cao (>108), một số chủng E.coli có thể sinh ít khí và màu xanh khuẩn lạc không rõ. Tất cả khuẩn lạc màu xanh, không có bọt khí được coi là E.coli. Lấy những khuẩn lạc màu xanh không có bọt khí kiểm tra lại nếu cần.
– Khi số lượng vi sinh không phải coliform cao như Pseudomonas thì lớp gel trên đĩa Petrifilm EC sẽ chuyển sang màu vàng.
– Những mẫu thực phẩm nhỏ có hình dạng bất thường và không gắn kết với bọt khí.
– Bọt khí có nhiều dạng khác nhau. Bọt khí có thể làm vỡ khuẩn lạc vì thế khuẩn lạc nằm phía ngoài bọt khí. Xem vòng tròn 1 và 2.
– Bọt khí có thể sinh ra do thao tác cấy không tốt hoặc khí từ mẫu bị giữ lại. Chúng có hình dạng bất thường và không liên quan đến khuẩn lạc. Xem vòng 3.
– Hình 1 – 10 cho thấy những hình dạng bọt khí khác nhau sinh ra từ khuẩn lạc. Tất cả các dạng trên đều được đếm.
Quy trình bảo quản, sử dụng kit test Petrifilm 3M kiểm tra khuẩn Ecoli, Coliforms.
Chú ý: Thời gian và nhiệt độ ủ khác nhau theo từng phương pháp. Những phương pháp chung nhất đã được chứng minh:
AOAC Official Method 991.14
- Đối với coliforms: Ủ 24h ± 2h ở 35°C ±1°C
- Đối với E.coli : ủ 48h ± 2h ở 35°C ± 1°C
AOAC Official Method 998.08
- Đối với E.coli (trong thịt, thịt gia cầm và hải sản): Ủ 24h ± 2h ở 35°C ± 1°C
NMKL method (147.1993)
- Đối với coliforms: ủ 24h ± 2h ở 37°C
- Đối với E.coli: Ủ 48h ± 2h ở 37°C
Để biết thêm chi tiết về các phương pháp và kit test kiểm tra Ecoli và Coliforms bằng Petrifilm 3M xin liên hệ với công ty innotec để được tư vấn chuẩn xác nhất:
Hotline: 0902.106.379 -Mr. Tùy
Ý kiến bạn đọc (0)